叶绿体中色素的提取和分离知识

　　一、 为什么要选新鲜绿色的幼嫩叶片？

　　因为叶绿色含N﹑Mg，而老叶中这两种矿质元素很多已经分解转移，所以鲜绿色的幼叶中叶绿素的含量高，适合于实验。

　　二、 制备滤纸条要剪去两角

　　实验中需将滤纸条的一端剪去两角，为什么这样做，如果不会怎么样呢？ 原来若不剪去滤纸条的两角，色素带的两边和中间不是在一条直线上。这是由于滤纸条两边水分子可以向三个方向散失，向上“跑”的速度快。而滤纸条中间的水分子只能向两个方向散失，分别是向内和向外，因而会“跑”得慢一些。而现在剪去滤纸条的两个角，可以在一定程度上加快中间色素的扩散速 度，减慢两边色素的扩散速度，从而真正意义上使这些色素从同一起点随层析液扩散。

　　三、为什么研磨时加无水乙醇或丙酮?

　　因为色素是有机物，根据相似相容性原理，无水乙醇或丙酮能溶解色素。

　　四、为什么加入少许二氧化硅?

　　在提取色素的过程中，要加人少许二氧化硅。原来是为了研磨得充分。二氧化硅就是石英沙子，研磨时可以增大强度，加快细胞和叶绿体的破裂，而使叶绿体中的色素释放出来。

　　五、为什么加入少许碳酸钙?

　　在提取色素的过程中，要加人少许碳酸钙。原来是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。叶绿体中的色素原本所处的环境具微碱性。在实验中,研磨会使细胞结构遭到破坏，细胞液中有机酸流出，酸性的细胞液就会接触到叶绿体中的色素，致使叶绿素的分子结构遭到破坏，使叶绿素失镁，呈黄褐色，如同我们看到到腌制的黄瓜会变色一样，而碳酸钙是强碱弱酸盐，碳酸钙在水中的溶解度很小，但还是有一部分得到溶解，中和细胞液的酸性，制造了一个弱碱环境，保护了色素。

　　六、为什么用单层尼龙布过滤?

　　在过滤时，漏斗基部放一块单层尼龙布，老教材中是用滤纸来过滤的。过滤的目的是去掉不需要的杂质如破碎的细胞、二氧化硅、碳酸钙等，相对而言，单层尼龙布可以让色素溶液更好地通过效果比滤纸要好。

　　七、 为什么用棉塞塞紧试管?

　　将色素收集在试管中后，要用棉塞塞紧。原因是色素很容易迅速地被空气中的氧气氧化分解乙醇酸和甘氨酸，从而使实验失败。

　　八、 为什么滤纸预先干燥处理?

　　这是因为干燥的滤纸，使层析液在滤纸上能快速扩散，所以预先干燥处理。

　　九、为什么滤液细线要直、细、匀?

　　因为滤液细线只有画得细而直，才能使色素随层析液扩散的起点一致，这样使分离出的色素带平整不发生重叠。

　　十、为什么滤液细线干燥后再画一两次?

　　这样可以分离到更多的色素，使分离出的色素带清晰分明。

　　十一、为什么滤液细线不触及层析液?

　　这直接关系到实验的成败如否，如果发生了这种情况，实验一定是失败的。为什么滤液细线不触及层析液是为了防止色素直接溶解到层析液中，这样就彻底得不到色素带了。

　　十二、从色素带中我们能得到什么信息？

　　最上端的橙黄色带为胡萝卜素，其次的黄色带为叶黄素，紧接其下的蓝绿色带为叶绿素a，最下方的黄绿色带是叶绿素b；最窄的色素带是胡萝卜素，最宽的色素带是叶绿素a；根据实际纸层析各色带的距离，叶绿素a和叶绿素b胡萝卜素的距离最小的，叶黄素两相邻色素带距离最大。